为什么要构建表达载体
因为方便后续载体携带目的基因进入受体细胞。
为什么要构建表达载体1
1、得到大量的DNA,虽然PCR也可以,但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR,而且每次都要重新提DNA和RNA才行,而且,PCR反应的试剂盒又不便宜,用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。
尽管构建克隆载体也存在操作复杂(相对于PCR),成功率不是极高,而且还要筛选,但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌,你就可以保存了,你想什么时候用,摇个菌,就可以制备到大量的DNA。
2、测序需要。你想转表达,你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的,不要以为你设计了个特异性引物,然后跟你mark的长度就可以确定了,这也只是推测,在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许,要拿去测序,而一般送测的.序列都是构建到载体上的序列,克隆载体上一般也都带有测序引物,已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
为什么要构建表达载体2
基因表达载体的构建是基因工程最重要的一个步骤。将目的基因与载体通过DNA连接酶连接形成一个整体,方便后续载体携带目的基因进入受体细胞,并将目的基因成功与受体细胞转导。
目的基因就是能够产生所需蛋白质的DNA片段,比如抗虫棉就是植入能产生抗虫蛋白的`目的基因。
启动子、终止子:启动子、终止子是目的基因DNA上特殊排序的碱基。RNA从启动子开始转录、翻译,到终止子结束。整个过程完成后便产生所需蛋白质。
标记基因:用于检测是否已经植入目的基因。植入的成功率其实很低,所以有必要选出已经植入的个体。比如抗虫棉,判断是否植入,用种植后让虫子吃的方法判断周期太长。
所以在目的基因前或后植入比如抗四环素基因(如果目的基因成功植入,抗四环素基因也一起植入),然后用四环素来淘汰植入失败的个体,剩下的都是还有目的基因的个体。除了抗四环素基因,还有荧光基因等,总之就是方便检测。
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