為什麼要構建表達載體
因為方便後續載體攜帶目的基因進入受體細胞。
為什麼要構建表達載體1
1、得到大量的DNA,雖然PCR也可以,但PCR擴增有出錯率、但你每做一次常規的PCR,而且每次都要重新提DNA和RNA才行,而且,PCR反應的試劑盒又不便宜,用PCR來製備大量DNA有點得不償失。
儘管構建克隆載體也存在操作複雜(相對於PCR),成功率不是極高,而且還要篩選,但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌,你就可以保存了,你想什麼時候用,搖個菌,就可以製備到大量的DNA。
2、測序需要。你想轉表達,你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的,不要以為你設計了個特異性引物,然後跟你mark的長度就可以確定了,這也只是推測,在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許,要拿去測序,而一般送測的.序列都是構建到載體上的序列,克隆載體上一般也都帶有測序引物,已確定這就是你要的那條序列。你要寫論文必須要給人真憑實據。
為什麼要構建表達載體2
基因表達載體的構建是基因工程最重要的一個步驟。將目的基因與載體通過DNA連接酶連接形成一個整體,方便後續載體攜帶目的基因進入受體細胞,並將目的基因成功與受體細胞轉導。
目的基因就是能夠產生所需蛋白質的DNA片段,比如抗蟲棉就是植入能產生抗蟲蛋白的`目的基因。
啟動子、終止子:啟動子、終止子是目的基因DNA上特殊排序的鹼基。RNA從啟動子開始轉錄、翻譯,到終止子結束。整個過程完成後便產生所需蛋白質。
標記基因:用於檢測是否已經植入目的基因。植入的成功率其實很低,所以有必要選出已經植入的個體。比如抗蟲棉,判斷是否植入,用種植後讓蟲子吃的方法判斷週期太長。
所以在目的基因前或後植入比如抗四環素基因(如果目的基因成功植入,抗四環素基因也一起植入),然後用四環素來淘汰植入失敗的個體,剩下的都是還有目的基因的個體。除了抗四環素基因,還有熒光基因等,總之就是方便檢測。
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